AVALIAÇÃO GÊNICA E PROTEICA DE CONSÓRCIOS MICROBIANOS NA DEGRADAÇÃO DO DIFENOCONAZOL.

Resumen

El uso extensivo de pesticidas es crucial para satisfacer la productividad agrícola en Brasil, pero presenta impactos negativos en el medio ambiente y en la salud humana. Entre los pesticidas, el Difenoconazol (DFZ) se destaca por inhibir el crecimiento fúngico de varios fitopatógenos. Sin embargo, se clasifica como altamente peligroso y de baja biodegradabilidad, tiene persistencia ambiental y bioacumulación en tejidos humanos y animales. Dadas las características del DFZ, la biorremediación se considera una alternativa viable al utilizar microorganismos para convertir contaminantes en compuestos menos tóxicos. Se centra en la producción de enzimas microbianas, especialmente oxidorreductasas, convirtiéndose en una estrategia económica, prometedora y con potencial en la degradación de compuestos recalcitrantes como el DFZ. Por lo tanto, este proyecto tiene como objetivo explorar el uso de consorcios microbianos para degradar el DFZ, realizando una evaluación del crecimiento bacteriano en un medio suplementado con DFZ, construcción de consorcios bacterianos, análisis de la toxicidad de los medios que contienen DFZ antes y después del tratamiento biológico, e investigación de los perfiles proteicos y genéticos de los consorcios microbianos. En este sentido, se activaron algunas bacterias de la biblioteca del laboratorio de biología molecular – ITP/SE, en medios LB (Luria Bertani) con medio MSM (medio de sales mínimas) y en medio MSM suplementado con DFZ comercial al 0,05%. Además, se construyeron seis consorcios constituidos por tríos bacterianos y un consorcio constituido por todos los aislados utilizados en este estudio. Se evaluó el crecimiento microbiano con medio suplementado y se realizaron pruebas de antagonismo, así como pruebas de ecotoxicidad en semillas de lechuga. El perfil genético se verificó mediante PCR para los genes catecol 1,2-dioxigenasa y catecol 2,3-dioxigenasa. Finalmente, se verificó el perfil proteico mediante electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-page) al 12%. Los resultados mostraron que los aislados tienen la capacidad de crecer en estos medios, indicando su potencial de crecimiento y degradación del pesticida. Las pruebas de antagonismo no mostraron la formación de halos inhibitorios, lo que indica que los microorganismos no inhiben el crecimiento entre ellos y no presentan actividad antagonista. En cuanto al crecimiento de los consorcios, C2, C4, C6 y C7 fueron los que presentaron mayor crecimiento a las 48 y 72 horas, indicando una adaptabilidad y capacidad de degradación de estos consorcios en el medio con el pesticida. La prueba de ecotoxicidad mostró que el tratamiento del DFZ con los consorcios C2 y C7 disminuye la toxicidad del pesticida en un 50%. El análisis del perfil proteico por SDS-PAGE mostró cuatro bandas de alrededor de 30 kDa comunes entre los aislados MI1 (Bacillus cereus), MI3 (Bacillus sp.), P.sp (Pseudomonas sp.) y el consorcio C7. Las bandas mostradas probablemente correspondan a enzimas peroxidasas asociadas al proceso de degradación del DFZ. El perfil genético mostró que el microorganismo MI29 (Bacillus sp.) tiene el gen catecol 2,3-dioxigenasa y el microorganismo 8BR tiene el gen catecol 1,2-dioxigenasa. Sin embargo, este trabajo proporcionó la formación de un consorcio eficaz en la degradación del DFZ, disminuyendo su toxicidad e indicando la participación de enzimas oxidorreductas en el proceso de degradación del pesticida mediante el análisis proteico-enzimático.