MÉTODO DE DIAGNÓSTICO POR AMPLIFICAÇÃO ISOTÉRMICA MEDIADA POR LOOP PARA DETECÇÃO DE LEISHMANIOSE EM FLEBOTOMÍNEOS

Resumo

RESUMO: Introdução: A leishmaniose é uma doença parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania. Mais de 350 milhões de pessoas residem em áreas de risco, e a cada ano surgem aproximadamente 2 milhões de novos casos, com mais de 40.000 mortes em todo mundo. Apesar de apresentar uma alta incidência anual de casos, continua sendo classificada como uma doença tropical negligenciada, distribuída especialmente em áreas tropicais e subtropicais, tendo fortes e complexas associações com a pobreza. A amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) é uma técnica que utiliza uma única temperatura para amplificação DNA, sem necessidade de termociclador. Sendo simples de usar, o LAMP apresenta alta sensibilidade, rapidez, baixo custo e fácil reprodutibilidade, proporcionando uma exibição visual de fácil interpretação. Objetivos: O presente trabalho tem como objetivo avaliar a aplicabilidade da técnica de LAMP na detecção da Leishmaniose nos insetos vetores, hospedeiros e em amostras clínicas de pacientes. Material e Métodos: Essa revisão bibliográfica foi realizada através da pesquisa nas base de dado PUBMED. Os descritores utilizados para a coleta de artigos foram “Loop-mediated isothermal amplification” e Leishmania. Após leitura dos títulos e resumos dos artigos, foram excluídos artigos de acordo com os critérios a seguir: artigos repetidos; artigos que aplicavam outras técnicas moleculares como PCR, artigos que utilizaram a LAMP para a detecção de outros organismos. Essa seleção resultou num total de 28 artigos, que foram utilizados para análise. Resultados e Conclusão: O método de LAMP foi utilizado com sucesso para a detecção de Leishmania sp. em flebotomíneos. Os alvos utilizados foram a região altamente conservada do gene 18S rRNA, sendo capaz de detectar as variadas concentrações testadas. Foi observado que o método desenvolvido pode ser utilizado para a amplificação de DNA utilizando-se o extrato bruto dos vetores coletados, apresentando uma alta sensibilidade de detecção. Uma das características mais significantes do ensaio recém-desenvolvido para a técnica de LAMP, é que ele tem uma grande vantagem na detecção de amplicons em relação PCR convencional, possibilitando a visualização do produto a olho nu. Assim, a simplificação é absolutamente fundamental para levar os diagnósticos às configurações do ponto de atendimento. A identificação e o monitoramento da taxa de infecção natural por Leishmania em flebotomíneos são indicadores epidemiológicos essenciais para a estimativa do risco de transmissão, taxa de prevalência da doença e intensidade de transmissão de flebotomíneos infectados. O método de detecção pode ser realizado em um sistema fechado, sem necessidade da abertura de tubos de reação ou manuseio pós-amplificação, fase com altas chances de contaminação sendo completamente evitada. A utilização do corante facilita muito a interpretação dos resultados, pois é altamente discernível e consistente. Como o mesmo é barato e pode ser armazenado à temperatura ambiente, esse corante pode aumentar tremendamente a aplicabilidade no campo. Essa abordagem promissora também poderia ser explorada em saúde pública veterinária para o diagnóstico da leishmaniose canina. O LAMP, portanto, é um método simplificado de amplificação detecção de fragmentos que podem complementar as ferramentas de vigilância disponíveis e gerar informações sobre a distribuição ou expansão da doença.